PolyPlus jetCRISPR產(chǎn)品
| 試劑 | jetCRISPR™ |
|---|---|
| 分子交付 | 核糖核蛋白：指導RNA和Cas蛋白（Cas9，Cpf1） |
| 應用 | CRISPR介導的基因組編輯 |
| 細胞類型 | 貼壁細胞和懸浮細胞 |
| 轉染數(shù) | 1.5 ml jetCRISPR™轉染試劑足以在24孔板中進行1250次轉染，或在6孔板中進行300次轉染 |
| 存儲 | 5°C±3°C，適當存放可穩(wěn)定6個月（502-01）至至少一年（其他包裝尺寸） |
CRISPR / Cas工程核酸酶系統(tǒng)是功能強大且高度特異性的基因組編輯工具。CRISPR / Cas是具有指導RNA（gRNA）分子的兩組分系統(tǒng)，該分子驅動Cas核酸酶（Cas9，Cpf1）到基因組內(nèi)的特定目標序列，以引入遺傳修飾（突變，插入或缺失）。
jetCRISPR™是一種創(chuàng)新試劑，專門設計用于在CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1實驗中提供RNP。jetCRISPR™帶來了很高的CRISPR基因組編輯效率，同時保持了出色的細胞活力和轉染后的形態(tài)。使用先進的技術進行CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1 RNP遞送！
| 產(chǎn)品 | 參考編號 | 產(chǎn)品尺寸 |
|---|---|---|
| jetCRISPR™ | 502-01 | 0.1毫升 |
| jetCRISPR™ | 502-07 | 0.75毫升 |
| SpCas9核酸酶 | 722-100 | 100微克 |
1.5 ml jetCRISPR™轉染試劑足以執(zhí)行約 在6孔板中進行300次轉染。
jetCRISPR™是專為RNP（指導RNA和Cas9蛋白復合物）的高轉染效率而設計的，因此可在不同細胞類型中的多種靶標上實現(xiàn)cas9介導的高基因組編輯效率（圖1和2）。
圖1：在HeLa細胞中使用jetCRISPR™實現(xiàn)高基因組編輯效率。在96孔板的每孔中，使用幾種RNP濃度的SpCas9核酸酶和HPRT1 sgRNA或陰性對照與0.3 µl jetCRISPR™試劑結合在HeLa細胞中進行RNP轉染。在48小時后轉染，T7消化產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠上運行，并與由G顯示BET染色：箱透（Syngene公司®）。收購均與Genesnap軟件進行（Syngene公司®）和INDEL的量化用的Genetools軟件（Syngene公司執(zhí)行®）。1：1083 bp的未切割片段； 2：827 bp的長切割片段； 3：256 bp的短切割片段。
jetCRISPR™轉染試劑的基因編輯效率比其他競爭對手更高，這使其成為CRISPR應用的優(yōu)選產(chǎn)品。
圖2：在用陽離子脂質體比較jetCRISPR™獲得了優(yōu)異的基因組編輯效率® CRISPRMAX™。RNP轉染的A549和用30nM的RNP（SpCas9核酸酶和HPRT1因組）與jetCRISPR™試劑的0.3微升或0.3微升的Lipofectamine HEK-293細胞中進行® CRISPRMAX™，每一個96孔板的孔。轉染后48小時，通過使用T7核酸內(nèi)切酶方法計算INDEL的百分比（％）來評估基因組編輯。該INDEL％是通過使用Genetools軟件（Syngene公司確定®）。
在Polyplus-transfection中，我們很自豪能使用對細胞極為溫和的試劑，在整個實驗過程中保持出色的細胞活力和形態(tài)。jetCRISPR™與血清和抗生素均兼容，因此可以在健康細胞的宜條件下進行RNP轉染（圖3）。
圖3：jetCRISPR™轉染后48小時的細胞活力和形態(tài)極棒。使用30 nM RNP（SpCas9核酸酶和HPRT1 sgRNA）在96孔板的每孔中用0.3 µl jetCRISPR™試劑對HEK-293和A549細胞進行RNP轉染。在48小時后轉染，細胞形態(tài)由相襯ZOE熒光細胞成像可視化（BIORAD ®）。
直接將Cas9作為蛋白質而不是質粒進行傳遞，可以輕松進行基因組編輯，因為該蛋白質易于使用。使用jetCRISPR™傳遞Cas9蛋白和gRNA可以實現(xiàn)快速可靠的基因編輯（圖4）。此外，Cas9蛋白從細胞中清除的速度將比質粒更快，因此可將脫靶效應降至低，并實現(xiàn)更具體的基因組編輯（Kim S等人；Genome Research 2014； 24：1012-1019）。
圖4：用jetCRISPR™獲得的HEK-293細胞快速，可靠的基因編輯效率。使用30 nM RNP（Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA）在96孔板中每孔加0.3μljetCRISPR™試劑在HEK-293細胞中進行RNP轉染。通過使用T7核酸內(nèi)切酶方法計算INDEL的百分比（％），可以在不同時間點評估基因組編輯。該INDEL％是通過使用Genetools軟件（Syngene公司確定®）。
jetCRISPR™是作為即用型解決方案提供的?，F(xiàn)在，轉染RNP是一個非常簡單的過程，只需幾個步驟：形成RNP復合物，添加轉染試劑并添加到孔中！
反向轉染和正向轉染都非常適合與jetCRISPR™一起使用，因此使您可以調整方案以適合您正在處理的細胞，板的形式以及分析時間。通過使用反向協(xié)議（圖5），數(shù)據(jù)將比使用正向協(xié)議的日期早一天。
圖5：jetCRISPR™反向方案
技術支持專家Alengo Nyamay'antu（PhD）介紹了基因組編輯中的轉染趨勢。她概述了將引導RNA和Cas9核酸酶同時傳遞到細胞中的解決方案。
